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透明質(zhì)酸鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法的研究

潘衛(wèi)松1 ，肖 瑛 2

（1.廣州市藥品檢驗所 ，廣東廣州510610；2.暨南大學(xué)藥學(xué)院 ，廣東廣州510632）

[摘 要]

目的：建立透明質(zhì)酸鈉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。

方法：按2005版《中國藥典》二部中的“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”，用不同廠家的鱟試劑對不同批號的透明質(zhì)酸鈉注射液分別進(jìn)行干擾試驗。

結(jié)果：透明質(zhì)酸鈉注射液的檢測濃度≤5 mg/ml時對細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法無干擾。結(jié)論：透明質(zhì)酸鈉注射液按限值 L=0.05 EU/ml 進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查是可行的。

[關(guān)鍵詞] 透明質(zhì)酸鈉注射液；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法；鱟試劑；干擾試驗

透明質(zhì)酸鈉是廣泛存在于人體內(nèi)的生理活性物質(zhì)，是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基乙糖組成雙糖單位聚合而成的一種黏多糖。透明質(zhì)酸鈉注射液是透明質(zhì)酸的注射用制劑，關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射可用于變形膝關(guān)節(jié)病和肩關(guān)節(jié)周圍炎的輔助治療，關(guān)節(jié)腔內(nèi)給予外源性的透明質(zhì)酸鈉，可保護(hù)軟骨、抑制炎癥反應(yīng)、利于軟骨修復(fù)、改善潤滑功能，從而可以緩解癥狀，增加關(guān)節(jié)活動度[1]。透明質(zhì)酸鈉注射液也可作為眼科手術(shù)輔助用藥，前房內(nèi)注射可用于白內(nèi)障囊內(nèi)、囊外摘除術(shù)，抗青光眼手術(shù)，角膜移植手術(shù)等，也可用于術(shù)后腸粘連[2]。為探討采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法檢測透明質(zhì)酸鈉注射液的可行性，筆者參照 2005 版《中國藥典》二部中“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”的應(yīng)用指導(dǎo)原則，對本品進(jìn)行了細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法學(xué)的研究，現(xiàn)報道如下：

1 儀器與試藥

1.1 儀器

SUB14 恒溫水浴鍋；MSI旋渦混合器。

1.2 試藥

細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（規(guī)格：140 EU/支，批號：150601- 200758）及細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET 水，規(guī)格：50 ml/支，批號 0612130）；
鱟試劑（TAL）A 0.1 ml/支 ，批號 ：0802201，靈敏度：0.25 EU/ml）；
鱟試劑TAL B（廈門市鱟試劑實驗廠有限公司，規(guī)格：0.1 ml/支，批號：080103，靈敏度：0.25 EU/ml）；
透明質(zhì)酸鈉注射液（規(guī)格：2 ml∶20 mg，批號：096200、095910、095600、112800、113300、113700）。

2 方法與結(jié)果

2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定

根據(jù)企業(yè)所附標(biāo)準(zhǔn)：透明質(zhì)酸鈉注射液細(xì)菌內(nèi)毒素限值為0.05 EU/mg。

2.2 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗

按照2005 版《中國藥典》二部附錄“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”規(guī)定，進(jìn)行鱟試劑的標(biāo)示靈敏度（λ）復(fù)核。結(jié)果見表1。

由表1可見，2批鱟試劑經(jīng)細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品檢查，λC均在0.5λ～2.0λ之間，結(jié)果均符合規(guī)定。

2.3 干擾預(yù)試驗[3]

2.3.1 熒光素鈉注射液有效稀釋濃度（MVC）的計算：根據(jù)公式 MVC=λ/L，其中L為透明質(zhì)酸素鈉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素限值 0.05 EU/mg，λ 為鱟試劑標(biāo)示靈敏度，目前市售鱟試劑靈敏度λ通常在0.50～0.03 EU/ml，則透明質(zhì)酸鈉注射液的對應(yīng)有效稀釋濃度為 ：C0.5=0.5/0.05 =10.000 mg/ml，C0.25=0.25/0.05=5.000 mg/ml，C0.125=0.125/0.0500=2.500 mg/ml，C0.06=0.06/0.05=1.250 mg/ml，C0.03=0.03/0.05=0.625 mg/ml。

2.3.2 預(yù)試驗：將上述系列濃度溶液記為 NPC。同時在上述NPC液中加入細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，使每一濃度的試驗液中均含有2λ 濃度的細(xì)菌內(nèi)毒素，記此系列溶液為 PPC。取兩個不同廠家的鱟試劑，分別與上述 PPC和 NPC進(jìn)行反應(yīng)，每一濃度重復(fù)兩管，并設(shè)陽性和陰性對照。結(jié)果見表 2。

由預(yù)干擾試驗結(jié)果可以初步了解：兩個廠家的鱟試劑對透明質(zhì)酸鈉注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素的試驗結(jié)果在 10 mg/ml 以下濃度時均無干擾。

2.4 正式干擾試驗

為了最終確認(rèn)透明質(zhì)酸鈉注射液是否存在干擾因素的影響，筆者進(jìn)行了正式干擾試驗：取透明質(zhì)酸鈉注射液用BET水分別進(jìn)行稀釋，使其最終干擾試驗濃度為5 mg/ml，按2005版《中國藥典》二部附錄中的“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查供試品干擾試驗項”進(jìn)行試驗，結(jié)果見表3。由表3可知，透明質(zhì)酸鈉注射液在 5 mg/ml 濃度時 Es/Et 均在0.5～2.0 范圍之內(nèi)，確認(rèn)在 5 mg/ml 及以下濃度時無干擾。

2.5 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

按2005 版《中國藥典》中“細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法”，使用2批不同廠家的鱟試劑分別對樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，并同時設(shè)立樣品的自身陽性對照品，結(jié)果見表4。

3 討論

由干擾預(yù)試驗結(jié)果可以初步發(fā)現(xiàn)，透明質(zhì)酸鈉注射液在10 mg/ml以下稀釋濃度時對兩個廠家生產(chǎn)的鱟試劑均無干擾作用。正式干擾試驗用5 mg/ml樣品濃度且用兩個廠家的鱟試劑結(jié)果 Es/Et均在0.5～2.0 范圍之內(nèi)，確認(rèn)在 5 mg/ml 及

以下濃度時無干擾，限值定為 0.05 EU/mg。透明質(zhì)酸鈉注射液可適用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，鱟試劑靈敏度應(yīng)為 0.25 EU/ml 或0.25 EU/ml以上[4-8]。

參考文獻(xiàn)（略）

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